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詳細(xì)介紹
培養(yǎng)與復(fù)蘇要點(diǎn)
（一）培養(yǎng)基與菌落 / 培養(yǎng)特性
推薦 Baird-Parker 瓊脂（選擇性培養(yǎng)基，抑制雜菌）或胰酪大豆胨瓊脂（TSA）：
Baird-Parker 瓊脂上：菌落呈黑色、圓形凸起，周圍有透明暈圈。
TSA 上：菌落呈金黃色、圓形光滑，表面有光澤，培養(yǎng) 48 小時(shí)后直徑可達(dá) 2-3mm（與沙門氏菌無(wú)色菌落差異顯著）；
液體培養(yǎng)（胰酪大豆胨肉湯，TSB）：呈均勻渾濁，后期因菌體聚集出現(xiàn)少量沉淀（無(wú)色素，與沙門氏菌液體培養(yǎng)特性鑒別）。
（二）培養(yǎng)條件與復(fù)蘇步驟
培養(yǎng)條件：溫度 37℃±1℃（最適生長(zhǎng)溫度，低于 30℃會(huì)延長(zhǎng)復(fù)蘇周期），相對(duì)濕度 60%-70%，兼性厭氧培養(yǎng)（振蕩轉(zhuǎn)速 180rpm 可促進(jìn)菌體增殖，靜態(tài)培養(yǎng)也可生長(zhǎng)），培養(yǎng) 16-20 小時(shí)達(dá)對(duì)數(shù)期（比 ATCC14028 短，無(wú)需前增菌階段）。
復(fù)蘇步驟：
活化：取凍干菌粉，加入 2mL 無(wú)菌 TSB，渦旋振蕩 1 分鐘使菌粉溶解，37℃、180rpm 振蕩培養(yǎng) 16 小時(shí)；
純化：取 0.1mL 活化菌液涂布 Baird-Parker 瓊脂平板，37℃培養(yǎng) 24 小時(shí)，挑取黑色帶透明暈圈的單菌落；
擴(kuò)繁：將單菌落接種至 50mL TSB，37℃、180rpm 振蕩培養(yǎng) 18 小時(shí)，制得濃度 10?-10? CFU/mL 的菌懸液（可通過(guò)麥?zhǔn)媳葷岱ㄐ?zhǔn)）。
（三）濃度校準(zhǔn)與鑒別驗(yàn)證
濃度校準(zhǔn)：采用涂布計(jì)數(shù)法，取菌懸液 10 倍梯度稀釋至 10??、10??，取 0.1mL 涂布 TSA 平板（3 個(gè)平行），37℃培養(yǎng) 24 小時(shí)計(jì)數(shù)，誤差需控制在 ±0.2 log 內(nèi)；
鑒別特征：
形態(tài)：革蘭氏染色呈陽(yáng)性球形（直徑 0.8-1.0μm），呈葡萄串狀排列（與沙門氏菌短桿狀、散在排列鑒別）；
生化：觸酶陽(yáng)性（滴加*產(chǎn)生氣泡，與沙門氏菌觸酶陽(yáng)性一致，但通過(guò)形態(tài)進(jìn)一步區(qū)分）
安全管控與存儲(chǔ)
（一）安全管控等級(jí)與操作要求
屬 BSL-2 級(jí)菌（致病，可通過(guò)污染食品引發(fā)食物中毒，也可經(jīng)傷口感染），與 ATCC14028 管控等級(jí)一致，但感染路徑側(cè)重不同（前者多為皮膚黏膜 / 食品，后者多為消化道），操作需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行：
個(gè)人防護(hù)：穿全包裹式服、戴 N95 口罩（防止菌霧吸入）及護(hù)目鏡，操作后用 75% 乙醇消毒手部，若接觸含菌高鹽食品模擬樣本，需額外用生理鹽水沖洗手部；
環(huán)境消毒：實(shí)驗(yàn)后用 0.5% 過(guò)氧乙酸噴霧消毒生物安全柜，作用 20 分鐘后擦拭，紫外燈照射 30 分鐘（菌體附著性低于沙門氏菌，無(wú)需延長(zhǎng)消毒時(shí)間）；地面、操作臺(tái)每周用 0.2% 含氯消毒劑擦拭；
廢棄物處理：含菌培養(yǎng)物需 121℃高壓滅菌 30 分鐘（與 ATCC14028 一致，需滅活腸毒素與菌體）；高鹽食品模擬樣本（如腌肉勻漿）需先加入等量 10% 次氯酸鈉溶液浸泡 30 分鐘，再滅菌處理；耗材按醫(yī)療有害廢棄物分類。
（二）存儲(chǔ)方法與管理
長(zhǎng)期存儲(chǔ)（推薦）：
凍干法：將對(duì)數(shù)期菌懸液與 12% 脫脂乳 + 8% 蔗糖保護(hù)劑 1:1 混合，凍干后密封，4℃冷藏存放，保質(zhì)期 4-5 年，存活率≥90%（腸毒素產(chǎn)毒能力穩(wěn)定性優(yōu)于普通存儲(chǔ)方式）；
-80℃冷凍法：菌懸液與 50% 無(wú)菌甘油按 1:1 混合（甘油終濃度 25%，避免損傷菌體），分裝凍存管快速凍存，保質(zhì)期 3-4 年（反復(fù)凍融不超過(guò) 2 次，否則影響產(chǎn)毒特性）；
短期存儲(chǔ)（1 個(gè)月內(nèi)）：將菌液接種至 TSA 斜面，37℃培養(yǎng) 24 小時(shí)后，4℃冷藏存放，每 7 天傳代 1 次，防止菌株退化；
存儲(chǔ)管理：?jiǎn)为?dú)存放于雙鎖生物安全冰箱的致病菌區(qū)域，與 ATCC14028 等致病菌分區(qū)（避免交叉污染影響生化鑒別）
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