產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗KIF18A多克隆抗體（貨號：A301-080A），采用表位特異性親和純化工藝制備，以完整IgG形式提供。該抗體針對人KIF18A蛋白C端區(qū)域（第848位氨基酸至C末端，即第898位）設計，能夠特異性識別全長KIF18A，適用于人源樣本的免疫檢測。KIF18A是驅動蛋白超家族成員之一，作為微管解聚酶，在有絲分裂紡錘體組裝、染色體整列及紡錘體 equator 定位中發(fā)揮關鍵調控作用。本抗體經(jīng)驗證適用于IP及WB應用，是研究細胞周期、有絲分裂進程及腫瘤增殖機制的重要工具。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 具體信息

靶標 | KIF18A

反應種屬 | 人

應用 | IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 第848位至C末端（第898位）

亞型 | IgG

標記物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）

儲存 | 2 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊d化鈉

儲存與穩(wěn)定性

儲存溫度：2 8 °C

有效期：1年

緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8），含0.09%疊d化鈉

疊d化鈉作為防腐劑存在。在使用HRP標記二抗進行檢測時，需注意疊d化鈉對過氧化物酶的抑制作用。如需進行細胞活性實驗或功能性研究（如抗體顯微注射），必須通過透析或超濾去除疊d化鈉。

推薦應用與稀釋度

以下為經(jīng)過驗證的應用條件：

應用類型 | 推薦稀釋度/用量 | 關鍵條件

免疫沉淀（IP） | 6 µg/mg裂解物 | 每毫克總蛋白裂解液使用6 µg抗體

蛋白質印跡（WB） | 1:2,000 1:10,000 | 5% Milk-TBST封閉和稀釋，一抗孵育過夜

特別說明：本抗體未經(jīng)IHC或ICC測試驗證。如需用于免疫染色，建議自行優(yōu)化或選擇已驗證的替代產(chǎn)品。

KIF18A生物學背景與應用價值

KIF18A在有絲分裂中的核心功能

驅動蛋白超家族包含40余種KIF馬達蛋白，沿微管參與細胞內運輸。KIF18A屬于驅動蛋白-8家族，其獨特之處在于微管解聚酶活性，而非傳統(tǒng)驅動蛋白的運輸功能。

1. 染色體整列（Chromosome Congression）

KIF18A定位于紡錘體微管的正端，通過調控微管動態(tài)不穩(wěn)定性，限制染色體在紡錘體 equatorial plate 的過度擺動，確保染色體正確整列。KIF18A缺失導致染色體不能正常排列在中期板，出現(xiàn)滯后染色體和多極分裂。

2. 紡錘體長度調控

KIF18A通過持續(xù)去聚合紡錘體微管，限制紡錘體的長度。這一功能確保了染色體在合適距離內被微管捕獲和排列。

3. 有絲分裂檢查點適應性

KIF18A參與紡錘體組裝檢查點（SAC）的沉默過程。當所有染色體正確整列后，KIF18A活性有助于解除SAC，促進后期的啟動。

4. 與磷酸化調控的關聯(lián)

KIF18A的別名PPP1R99提示其可作為蛋白磷酸酶1（PP1）的調控亞基。通過PP1募集，KIF18A可能參與去磷酸化事件，調控有絲分裂底物。

疾病及治療相關性

腫瘤過表達：KIF18A在多種實體腫瘤（乳腺癌、結直腸癌、肝癌、卵巢癌、膠質瘤）中顯著上調，高表達與患者不良預后及化療耐藥相關。

抗有絲分裂藥物靶點：由于KIF18A在有絲分裂中的關鍵作用，且正常組織與增殖組織表達差異明顯，KIF18A已成為新型抗有絲分裂藥物開發(fā)的潛在靶點（規(guī)避傳統(tǒng)紫杉烷類藥物對微管的非特異性毒副作用）。

著絲粒/動粒功能研究：KIF18A功能缺陷導致染色體不穩(wěn)定（CIN），是腫瘤遺傳異質性的驅動因素之一。

實驗操作注意事項

1. 細胞周期同步化優(yōu)化：KIF18A表達具有細胞周期依賴性，在G2/M期（尤其是M期）表達最高。如需檢測內源KIF18A，建議使用雙胸腺嘧啶阻斷或諾考達唑同步化后釋放收集有絲分裂細胞，以提高檢測靈敏度。

2. 使用前處理：輕柔混勻，避免劇烈振蕩。長期保存后可能出現(xiàn)微量沉淀，建議12,000 × g離心2分鐘去除聚集物。

3. 稀釋液選擇：WB必須使用5% Milk-TBST。避免使用BSA作為封閉劑，某些批次的BSA可能含有IgG，但不影響本體系，但Milk效果更佳。

4. 疊d化鈉處理：如需將抗體用于細胞顯微注射或功能性抑制實驗，必須通過透析或超濾去除疊d化鈉。否則僅限用于固定或裂解后的樣本檢測。

5. 分裝建議：由于有效期僅為1年，建議收到后分裝為10-20 µl/管，儲存于2-8°C，嚴禁冷凍。

6. 微管互作研究注意事項：如計劃研究KIF18A與微管的結合，裂解液中需添加微管穩(wěn)定劑（如紫杉醇10 µM、GTP 1 mM）和去聚合抑制劑。常規(guī)裂解液（含0.5% NP-40）會使微管解聚，導致KIF18A從微管上釋放。

相關產(chǎn)品推薦

抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體——用于IP產(chǎn)物的WB檢測

山羊抗兔IgG（H+L）HRP——用于常規(guī)細胞裂解液WB檢測

諾考達唑（nocodazole）——用于有絲分裂同步化處理，富集M期細胞

HeLa或U2OS細胞裂解液（有絲分裂期富集）——KIF18A高表達陽性對照