對(duì)于單克隆抗體，最有效的滴度測(cè)定方法之一是親和色譜法。親和色譜是一種利用特定蛋白之間（如抗原/抗體）高度特異性分子間相互作用的*分離技術(shù)。安捷倫提供了幾種專門的親和產(chǎn)品，包括用于對(duì)單克隆抗體（mAb）進(jìn)行分離和定量的Biomonolith Protein A 和 Protein G 色譜柱。

近年來(lái)，mAb 已成為可滿足多種疾病治療需求的主要生物制藥產(chǎn)品。這些經(jīng)特別設(shè)計(jì)的抗體具有特定的基因構(gòu)成，能夠更好地以病原為靶標(biāo)。在這些抗體的開發(fā)過(guò)程中，Protein A 和 Protein G 分析型親和色譜柱可用于測(cè)定各種細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的抗體滴度或濃度，以選出高產(chǎn)量的克隆。

Protein A 和 G 色譜柱對(duì)抗體均具有高親和性，因此它們僅結(jié)合細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的抗體。然而，它們的選擇性各有不同。例如，Agilent Bio-Monolith Protein A 色譜柱對(duì)人 IgG1、IgG2 和 IgG4 亞型具有高親和力，對(duì) IgG3 沒有親和性，而 Agilent Bio-Monolith Protein G 色譜柱對(duì)人 IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4 亞型都具有高親和力。IgG1 憑借其穩(wěn)定性（半衰期較長(zhǎng)）、在血清中的豐度以及較少出現(xiàn)聚集，成為最常用的生物治療藥物。通常不使用 IgG3，因?yàn)樗菀拙奂也惶€(wěn)定。相反，Protein G 色譜柱對(duì)人亞類單克隆抗體（例如 IgA 和 IgD）沒有親和性，但是 Protein A 色譜柱能夠與這些抗體結(jié)合（表 1）。這些色譜柱相互補(bǔ)充，Protein G 對(duì)不與 Protein A 結(jié)合的 mAb 具有親和性，反之亦然。因此，它們能夠?qū)崿F(xiàn)目前作為生物治療藥物進(jìn)行開發(fā)的各種 mAb 亞類和片段的滴度測(cè)定。

親和色譜的樣品前處理方法與 HPLC 蛋白質(zhì)分析的樣品前處理方法類似。進(jìn)樣前需要極少的樣品前處理，以優(yōu)化色譜柱性能并延長(zhǎng)色譜柱壽命。

?Agilent Bio-Monolith rProtein A（重組 Protein A）分析柱是 Bio-Monolith 和親和色譜家族的新成員。該色譜柱可用于高速分析單克隆抗體（mAb）滴度和小規(guī)模純化，并可輕松集成到二維液相色譜等其他分析工作流程中。本研究以最大流速測(cè)試了重組 Protein A 色譜柱，證明了一種色譜結(jié)合/洗脫法可用于測(cè)定 mAb 滴度，該方法具有非常短的運(yùn)行時(shí)間（1 分鐘），適用于克隆篩選、工藝開發(fā)及優(yōu)化等高通量應(yīng)用。

此外，本篇應(yīng)用文集中還包含使用 Agilent Bio-Monolith Protein A HPLC 色譜柱縮短定量分析人 IgG 的分析周期、使用 Agilent Bio-Monolith Protein A 色譜柱和 LC/MS 進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)優(yōu)化等應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)供您查閱。