細(xì)胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。 需要注意的是： 因該類樣本干擾因素較多，如細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、ph、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測(cè)不到的情況。

· 目的物是分泌型，主要在胞外，即可選擇細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本，細(xì)胞培養(yǎng)上清處理方法相對(duì)簡(jiǎn)單，取細(xì)胞培養(yǎng)上清，1000 × g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測(cè)。

· 目的物主要存在于胞內(nèi)，則建議選擇細(xì)胞裂解液作為樣本類型。

細(xì)胞裂解液：

1. 貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）；

2. 將收集到的細(xì)胞用冷 PBS 洗3次；

3. 物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：

o 超聲破碎：取適量PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂；

o 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20℃以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3次，使細(xì)胞溶脹破碎；

4. 將標(biāo)本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用。

注: 一般情況下，物理方法如反復(fù)凍融，勻漿等方法會(huì)比化學(xué)方法好，因?yàn)榛瘜W(xué)方法會(huì)引入酸或堿，可能會(huì)對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響。利用化學(xué)的細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，如果去污劑成分會(huì)干擾抗原抗體反應(yīng)影響檢測(cè)效果，推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。

樣本保存：

處理樣本的過(guò)程就是收集目標(biāo)蛋白的過(guò)程，由于蛋白容易變性，降解，故該過(guò)程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要，尤其注意不要反復(fù)凍融，樣本處理之后可分裝密封保存， 4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過(guò) 1 個(gè)月，-80度不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。