自20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)mRNA以來(lái)，人們進(jìn)行了許多嘗試，試圖利用mRNA作為向人體輸送治療藥物和蛋白質(zhì)的手段，近些年來(lái)，隨著技術(shù)的快速發(fā)展，mRNA的快速降解問(wèn)題的解決和對(duì)有效輸送方法的開(kāi)發(fā)進(jìn)展也逐漸加快，與此同時(shí)，貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)也推出了mRNA疫苗開(kāi)發(fā)中使用的先進(jìn)工具及解決方案（戳此查看貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)解決方案），為加速發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn)有效疫苗提供強(qiáng)大的支撐作用。

在mRNA疫苗研發(fā)過(guò)程中，使用高通量自動(dòng)化克隆管線，包括Echo 525聲波移液工作站和QPix 420克隆挑選系統(tǒng)來(lái)組裝Golden Gate構(gòu)建體，可用于高效冠狀病毒刺突變體克隆的自動(dòng)化。而中和試驗(yàn)（neutralization assay）通常屬于臨床前研究階段（preclinical stage）的重要功能性評(píng)價(jià)步驟，用于評(píng)估細(xì)胞或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中疫苗誘導(dǎo)的抗體是否能阻斷病毒感染、抗體的中和能力強(qiáng)弱（滴度）、不同設(shè)計(jì)或劑量方案的免疫效果對(duì)比，通常有假病毒中和試驗(yàn)、活病毒中和試驗(yàn)2種，是判斷疫苗是否有效即產(chǎn)生抗體質(zhì)量的關(guān)鍵功能性指標(biāo)之一。

假病毒中和試驗(yàn)具有安全性、規(guī)?；妥詣?dòng)化的特點(diǎn)，因此在mRNA疫苗評(píng)價(jià)中最為常用。而假病毒中和試驗(yàn)的自動(dòng)化，圍繞自動(dòng)化液體處理+自動(dòng)化培養(yǎng)+自動(dòng)化檢測(cè)+數(shù)據(jù)四個(gè)模塊，將“功能性免疫檢測(cè)”從低通量手工實(shí)驗(yàn)，升級(jí)為高通量、標(biāo)準(zhǔn)化、可工業(yè)化的平臺(tái)能力。貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)具有軟硬件成熟解決方案，在假病毒中和試驗(yàn)自動(dòng)化中積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)和數(shù)據(jù)。下面簡(jiǎn)單介紹幾個(gè)基于熒光素酶化學(xué)發(fā)光法和高內(nèi)涵顯微成像法假病毒中和試驗(yàn)的自動(dòng)化案例：

作為mRNA疫苗的另一個(gè)應(yīng)用方向，基因遞送治療性單克隆抗體（mAb）以及其他生物制劑徹底改變了醫(yī)學(xué)；然而，與相對(duì)不被接受者免疫系統(tǒng)注意到的治療性小分子不同，生物制劑通常足夠大，具有免疫原性。這可能導(dǎo)致接受者產(chǎn)生抗藥物抗體（ADA）?？筸Ab ADA可引起mAb中和和加速mAb的清除，導(dǎo)致功效顯著降低。ADA還與嚴(yán)重的急性反應(yīng)有關(guān)，如過(guò)敏反應(yīng)和長(zhǎng)期免疫復(fù)合物相關(guān)疾病。使用去除了T細(xì)胞表位的全人mAb和人源化mAb有助于降低治療性mAb的免疫原性，但目前還不可能預(yù)先排除ADA誘發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。因此，mAb的臨床前和臨床研究必須包括ADA誘導(dǎo)的篩選，并且ADA產(chǎn)生及其臨床后果的評(píng)估對(duì)于監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)生物制品是必要的。與作為蛋白質(zhì)遞送的常規(guī)治療性mAb不同，工程化人源IgG1 mAb通過(guò)包封在脂質(zhì)納米顆粒（LNP）中的mRNA靜脈內(nèi)遞送，并且在接受者體內(nèi)轉(zhuǎn)錄成蛋白。基因遞送mAb的優(yōu)點(diǎn)是開(kāi)發(fā)更快，并且放大生產(chǎn)更具成本效益。

在此，小貝介紹一種開(kāi)發(fā)用于檢測(cè)大鼠抗體篩選和確證的橋接ELISA自動(dòng)化方法，并評(píng)價(jià)試驗(yàn)的特異性、靈敏度、選擇性、無(wú)前區(qū)效應(yīng)、線性、試驗(yàn)內(nèi)和試驗(yàn)間精密度以及魯棒性等。這一方法學(xué)和和方法提供了一個(gè)可適用于基因遞送mAbs及其他生物制劑的臨床前測(cè)試中ADA的自動(dòng)檢測(cè)和確認(rèn)的模板，也為非單一應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化平臺(tái)提供新應(yīng)用方向。

SAMI EX控制自動(dòng)化動(dòng)態(tài)排程操作，以根據(jù)批處理大小和用戶(hù)設(shè)定的可接受時(shí)序范圍，最小化總運(yùn)行時(shí)間。這意味著操作的時(shí)間和順序會(huì)根據(jù)批次大小而變化。因此，單批次中不同板的結(jié)果可能存在差異，并且根據(jù)單板與4板排程的不同而有所差異。為評(píng)估篩選試驗(yàn)的板間精度，在單次篩選測(cè)試中，對(duì)高、中、低和陰性對(duì)照組的四份，每份在四塊板上四個(gè)復(fù)孔。所有孔板中，A450與anti-ID水平成正比，A450的板間%CV在所有對(duì)照中均低于10%（高：1.8%，中：3.8%，低：9.5%，陰：7.9%）。這些%CV與板內(nèi)精度結(jié)果接近，且明顯低于檢測(cè)間的%CV。在用Bonferroni的多重比較檢驗(yàn)進(jìn)行雙因子方差分析（p=0.17）評(píng)估時(shí)，單次四盤(pán)測(cè)試中陽(yáng)性對(duì)照組與四次獨(dú)立單盤(pán)測(cè)試的歸一化結(jié)果無(wú)顯著差異。因此，篩選試驗(yàn)無(wú)論批次大小如何都能給出可重復(fù)的結(jié)果，證明SAMI EX排程的板間運(yùn)行精度和魯棒性。

基于穩(wěn)定的測(cè)試驗(yàn)證結(jié)果，大鼠ADA Screening ELISA（篩選ELISA）和Confirmatory ELISA（確認(rèn)ELISA）得以自動(dòng)化開(kāi)發(fā)。然后使用自動(dòng)化方案來(lái)評(píng)價(jià)LNP包封的編碼DH1042的mRNA給藥的大鼠血清中的抗DH1042抗體。大鼠接受兩個(gè)劑量的0.1、0.4或0.6 mg/kg/劑量的LNP-mRNA，間隔8天。第二次給藥后21天，不同劑量水平的50-100%的大鼠產(chǎn)生了確認(rèn)的抗DH1042抗藥抗體（ADA）。對(duì)照組中沒(méi)有動(dòng)物產(chǎn)生抗DH1042 ADA。這一基于通用型Biomek液體處理工作站、并由SAMI EX動(dòng)態(tài)排程軟件驅(qū)動(dòng)的抗治療性單克隆抗體抗藥抗體檢測(cè)自動(dòng)化分析方法的開(kāi)發(fā)、驗(yàn)證與應(yīng)用，可便捷地應(yīng)用于其他物種及治療性藥物的抗藥抗體檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)。

通過(guò)以上介紹我們不難發(fā)現(xiàn)，自動(dòng)化已經(jīng)成為當(dāng)前mRNA疫苗研發(fā)與抗體評(píng)價(jià)的一個(gè)關(guān)鍵發(fā)展方向，尤其在高通量篩選、標(biāo)準(zhǔn)化和工業(yè)化檢測(cè)中非常重要。貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)可為您提供專(zhuān)業(yè)的mRNA疫苗自動(dòng)化解決方案，歡迎感興趣的小伙伴撥打熱線與我們聯(lián)系。