一、 【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：包蟲病IgG抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）
英文名稱：Hydatid Disease IgG Antibody ELISA Kit

二、 【用途】

本試劑盒用于定性或半定量檢測人血清或血漿樣本中的抗細粒棘球絳蟲（Echinococcus granulosus）和多房棘球絳蟲（E. multilocularis）IgG抗體。
主要用于包蟲?。倚桶x病和泡型包蟲病）的輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

三、 【檢驗原理】

采用間接酶聯(lián)免疫吸附法（Indirect ELISA）：

1. 微孔板預(yù)包被有純化的包蟲病抗原（通常是細粒棘球蚴抗原或混合抗原）。

2. 將稀釋后的待測樣本加入微孔中，如果樣本中含有抗包蟲病IgG抗體，則會與孔內(nèi)的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。

3. 洗板去除未結(jié)合的物質(zhì)。

4. 加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的鼠抗人IgG抗體（酶標二抗），該二抗會與步驟2中結(jié)合在板上的IgG抗體特異性結(jié)合。

5. 再次洗板，去除未結(jié)合的酶標二抗。

6. 加入底物液（TMB），酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，產(chǎn)生藍色。

7. 加入終止液（Stop Solution）終止反應(yīng)，藍色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。

8. 用酶標儀在450nm波長（參比波長630nm）下測定各孔的吸光度（OD值）。OD值的高低與樣本中抗包蟲病IgG抗體的含量成正比。

四、 【主要組成成分】

1. 預(yù)包被微孔板：1板（12條×8孔）

2. 陰性對照：1瓶

3. 陽性對照：1瓶

4. 校準品/臨界值對照：1瓶（部分試劑盒提供）

5. 樣本XI釋液：1瓶

6. 酶結(jié)合物（濃縮或即用型）：1瓶

7. 濃縮洗滌液（20×或25×）：1瓶（使用前需用蒸餾水或去離子水稀釋）

8. 底物液A、底物液B（TMB）：各1瓶

9. 終止液：1瓶

10. 封板膜：若干

11. 說明書：1份

五、 【樣本要求】

樣本類型：人血清或血漿（EDTA、肝SU鈉或枸櫞SUAN鈉抗凝）。

樣本處理：無溶血、無乳糜、無微生物污染。樣本在2-8°C下可保存一周，如需長期保存，應(yīng)置于-20°C以下，避免反復(fù)凍融。檢測前需恢復(fù)至室溫并混勻。

六、 【檢驗方法】

1. 準備工作：將所有試劑和樣本恢復(fù)至室溫（18-25°C）。按說明書要求配制好工作濃度的洗滌液。

2. 編號：取出所需數(shù)量的微孔條，固定在板架上。

3. 稀釋加樣：

4. 設(shè)空白孔1孔（不加任何液體）、陰性對照孔2-3孔、陽性對照孔2-3孔、校準品孔（如有）2孔。

5. 在相應(yīng)孔中分別加入陰性對照、陽性對照、校準品和用樣本XI釋液稀釋后的待測樣本100μL。

6. 空白孔不加任何物質(zhì)。

7. 孵育：蓋上封板膜，置37°C溫育30分鐘。

8. 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿每孔，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后在吸水紙上拍干。

9. 加酶：除空白孔外，每孔加入酶結(jié)合物100μL。

10. 孵育：蓋上封板膜，置37°C溫育30分鐘。

11. 洗滌：重復(fù)步驟5的洗滌過程。

12. 顯色：每孔（包括空白孔）依次加入底物液A、底物液B各50μL，輕輕混勻，37°C避光顯色15分鐘。

13. 終止：每孔加入終止液50μL，輕輕混勻。

14. 讀數(shù)：在終止反應(yīng)后15分鐘內(nèi)，用酶標儀于450nm波長（參考波長630nm）測量各孔的OD值。

七、 【結(jié)果判斷】

1. 臨界值（Cut-off值）的計算方法因試劑盒而異，請務(wù)必以所用試劑盒說明書為準。 常見計算方法如下：

2. 計算陰性對照平均OD值（NCX）。

3. 計算臨界值（Cut-off Value）：

常見公式：Cut-off = NCX + 0.15 或 Cut-off = 陰性對照均值 × 2.1 或使用校準品值。具體公式見說明書。

結(jié)果解釋：

陽性（Positive）：樣本OD值 ≥ Cut-off值。

陰性（Negative）：樣本OD值 < Cut-off值。

*注：部分試劑盒會提供灰區(qū)（Equivocal）范圍，如樣本OD值在Cut-off值的0.9-1.1倍之間，建議隔周復(fù)查或用其他方法確認。

八、 【檢驗方法的局限性】

1. 本試驗僅用于檢測IgG抗體，感染早期抗體可能未達到檢測水平，可能出現(xiàn)假陰性。

2. 與其他寄生蟲?。ㄈ缒椅豺什?、肝吸蟲病等）可能存在交叉反應(yīng)，導(dǎo)致假陽性。

3. 免疫抑制劑治療或免疫功能低下的患者可能產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

4. 本試劑檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能作為包蟲病確診的WEI一依據(jù)，必須結(jié)合患者的臨床癥狀、影像學(xué)檢查（如B超、CT）和流行病學(xué)史進行綜合判斷。病原學(xué)檢查是確診的金標準。

九、【儲存條件及有效期】

未開封試劑盒：2-8℃避光保存，切勿冷凍。

有效期：通常為6-12個月，具體見外包裝盒標簽。

開封后：已稀釋的洗滌液可在2-8℃保存1個月。其他液體組分應(yīng)根據(jù)說明書要求保存和使用。

十、【注意事項】
本品僅用于體外診斷。
操作時必須穿戴手套，所有樣本和試劑均應(yīng)視為有潛在傳染性物質(zhì)處理。
不同批號、不同品牌的試劑組分不得混用。
請勿使用過期試劑。
嚴格控制反應(yīng)溫度、時間和洗滌操作，這些因素會嚴重影響實驗結(jié)果。