產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的Claspin抗體（貨號A300-266A）是一種兔源多克隆抗體，特異性靶向人源Claspin蛋白。該抗體以全I(xiàn)gG形式提供，濃度為1000 µg/ml，經(jīng)抗原親和純化，未偶聯(lián)標(biāo)記物，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）檢測。

免疫原與特異性

本抗體的免疫原對應(yīng)人源Claspin蛋白第725至775位氨基酸殘基之間的區(qū)域，參考序列號為AAG24515.1（GeneID 63967）。通過表位特異性親和純化工藝，將針對Claspin固定化表位的抗體從抗血清中分離純化，確保高特異性識別目標(biāo)抗原。

技術(shù)參數(shù)

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶標(biāo) | Claspin (CLSPN)

反應(yīng)性 | 人

應(yīng)用 | 免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）、Western Blot（WB）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全I(xiàn)gG

免疫原 | 第725–775位氨基酸區(qū)間

同型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/ml

儲存條件 | 2–8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

濃度測定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定，其中1 mg/ml IgG在280 nm波長下的吸光度（A280）為1.4。

Western Blot實(shí)驗(yàn)方案

推薦稀釋度

1:500 – 1:2,500

實(shí)驗(yàn)條件

封閉及稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育（4°C）

二抗（細(xì)胞裂解液WB）：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB）：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號S100-020），以避免免疫沉淀洗脫物中IgG重鏈的干擾。

樣品制備建議

Claspin分子量較大（約150-170 kDa），建議使用含有蛋白酶抑制劑的RIPA緩沖液裂解細(xì)胞。為檢測磷酸化修飾，需同時添加磷酸酶抑制劑（如Na3VO4、β-甘油磷酸鈉）。

免疫沉淀實(shí)驗(yàn)方案

推薦用量：6 µg抗體/mg細(xì)胞裂解物

裂解液：推薦使用非變性裂解緩沖液（如50 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl，1% NP-40，0.5%脫氧膽酸鈉，含蛋白酶和磷酸酶抑制劑），以保留蛋白復(fù)合物完整性。

捕獲基質(zhì)：Protein A瓊脂糖或磁珠。

免疫組化實(shí)驗(yàn)方案

推薦稀釋度：1:500 – 1:2,000

抗原修復(fù)：對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。

封閉：使用5%正常血清（與二抗同源）封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

檢測：可采用生物素化二抗配合DAB顯色，或熒光標(biāo)記二抗進(jìn)行免疫熒光。

靶點(diǎn)背景信息

蛋白功能

Claspin是一種檢查點(diǎn)蛋白，在復(fù)制脅迫下與檢查點(diǎn)激酶1（Chk1）相互作用并調(diào)控其活性。Claspin與Chk1的相互作用是ATR依賴性Chk1激活所必需的。該相互作用涉及Claspin的磷酸化修飾，而Chk1激酶活性可能參與這一磷酸化過程。

Claspin在DNA損傷存在或不存在的情況下均可定位于染色質(zhì)，并且與增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）結(jié)合，作為DNA復(fù)制機(jī)器的必需組分。這種與復(fù)制機(jī)器的關(guān)聯(lián)提示Claspin在連接DNA復(fù)制與DNA損傷信號傳導(dǎo)及Chk1激活中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

分子機(jī)制

在未受干擾的S期中，Claspin與PCNA結(jié)合，定位在復(fù)制叉處。當(dāng)復(fù)制叉遭遇阻滯（如核苷酸耗竭、DNA損傷或拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑）時，ATR被激活并磷酸化Claspin，促進(jìn)其與Chk1的結(jié)合。Claspin作為一種銜接蛋白，將Chk1呈遞給ATR進(jìn)行磷酸化激活?；罨腃hk1隨后磷酸化CDC25A和WEE1，抑制CDK活性，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯并穩(wěn)定復(fù)制叉。

Claspin的表達(dá)和穩(wěn)定性受細(xì)胞周期調(diào)控。其在G1期水平較低，S期和G2期升高，進(jìn)入有絲分裂時被APC/C復(fù)合物降解。