產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的eIF3B/EIF3S9抗體（貨號(hào)A301-761A）是一種兔源多克隆抗體，特異性靶向人源真核翻譯起始因子3亞基B（eukaryotic translation initiation factor 3 subunit B，亦稱eIF3S9或eIF3 p110）。該抗體以全I(xiàn)gG形式提供，濃度為200 µg/ml，經(jīng)抗原親和純化，未偶聯(lián)標(biāo)記物，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）檢測(cè)。

免疫原與特異性

本抗體的免疫原對(duì)應(yīng)人源eIF3B蛋白第100至150位氨基酸殘基之間的區(qū)域，參考序列號(hào)為NP_003742.2（GeneID 8662）。通過表位特異性親和純化工藝，將針對(duì)eIF3B固定化表位的抗體從抗血清中分離純化，確保高特異性識(shí)別目標(biāo)抗原。該表位位于eIF3B蛋白的N端附近，該區(qū)域包含一個(gè)非經(jīng)典的RNA識(shí)別基序（RRM），與eIF3復(fù)合物的組裝和RNA結(jié)合功能密切相關(guān)。

技術(shù)參數(shù)

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶標(biāo) | eIF3B / EIF3S9 (Eukaryotic translation initiation factor 3 subunit B)

反應(yīng)性 | 人

應(yīng)用 | 免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）、Western Blot（WB）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全I(xiàn)gG

免疫原 | 第100–150位氨基酸區(qū)間

同型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 200 µg/ml

儲(chǔ)存條件 | 2–8 °C

保質(zhì)期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉

濃度測(cè)定方法

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定，其中1 mg/ml IgG在280 nm波長(zhǎng)下的吸光度（A280）為1.4。

Western Blot實(shí)驗(yàn)方案

推薦稀釋度

1:2,000 – 1:10,000

實(shí)驗(yàn)條件

封閉及稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育（4°C）

二抗（細(xì)胞裂解液WB）：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB）：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020），以避免免疫沉淀洗脫物中IgG重鏈（約55 kDa）對(duì)目標(biāo)信號(hào)產(chǎn)生干擾。

樣品制備與凝膠選擇

eIF3B分子量約為110–116 kDa。推薦使用8-10% SDS-PAGE凝膠進(jìn)行分離。轉(zhuǎn)印可采用濕轉(zhuǎn)（100V，1.5小時(shí)）或半干轉(zhuǎn)。使用PVDF或硝酸纖維素膜均可。

免疫沉淀實(shí)驗(yàn)方案

推薦用量：6 µg抗體/mg細(xì)胞裂解物

裂解液建議：推薦使用含蛋白酶抑制劑的溫和裂解緩沖液（如50 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl，1% NP-40，0.5%脫氧膽酸鈉），以維持eIF3全復(fù)合物的完整性。

捕獲基質(zhì)：Protein A瓊脂糖或磁珠。

免疫組化實(shí)驗(yàn)方案

推薦稀釋度：1:100 – 1:500

抗原修復(fù)：對(duì)于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（微波或高壓修復(fù)）。

封閉與檢測(cè)：建議使用5%正常血清（與二抗同源）封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。可采用生物素化二抗配合DAB顯色，或熒光標(biāo)記二抗進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)。

靶點(diǎn)背景信息

蛋白功能

真核起始因子3亞基B（eIF3B）是真核起始因子3（eIF3）至少13個(gè)非相同蛋白亞基之一。eIF3是最大的真核起始因子（約650 kDa），其核心功能是促進(jìn)40S核糖體亞基結(jié)合至細(xì)胞mRNA 5’端帽子結(jié)構(gòu)（m7GpppN）附近，從而啟動(dòng)翻譯。

eIF3B是一個(gè)保守的亞基，屬于eIF3的功能核心組分。它具有一個(gè)非經(jīng)典的RNA識(shí)別基序（RRM），并能直接與eIF3S1亞基相互作用。eIF3B在eIF3復(fù)合物組裝、mRNA識(shí)別以及43S前起始復(fù)合物形成中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

結(jié)構(gòu)與相互作用

分子量：約110–116 kDa（氨基酸序列計(jì)算值約105 kDa，SDS-PAGE表觀分子量約110–116 kDa）。

亞基定位：eIF3B位于eIF3復(fù)合物的核心區(qū)域，與eIF3A、eIF3C、eIF3G等亞基共同構(gòu)成復(fù)合物骨架。

相互作用伙伴：除eIF3S1外，eIF3B還與其他eIF3亞基、40S核糖體蛋白及mRNA結(jié)合蛋白相互作用。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)與功能特點(diǎn)

1. 三平臺(tái)通用驗(yàn)證（IHC/IP/WB）：本抗體在免疫組化、免疫沉淀和Western Blot中均提供推薦工作條件，覆蓋了組織定位、蛋白復(fù)合物捕獲和表達(dá)定量的一體化研究需求。IHC起始稀釋度1:100–1:500，并明確提供檸檬酸緩沖液pH 6.0修復(fù)方案；WB稀釋范圍1:2,000–1:10,000，靈敏度高，適合內(nèi)源性eIF3B檢測(cè)。

2. 抗原親和純化：采用針對(duì)eIF3B第100–150位表位的固相親和純化，有效去除與其它eIF3亞基或非特異性蛋白交叉反應(yīng)的抗體，顯著降低IHC和WB中的背景信號(hào)，提高IP產(chǎn)物的純度。

3. BSA穩(wěn)定化TBS配方：緩沖液含0.1% BSA作為載體蛋白，防止抗體在低濃度下吸附損失；0.09%疊d化鈉作為防腐劑。2–8°C下可穩(wěn)定保存1年，無需冷凍，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的活性下降。

4. IP-WB聯(lián)用優(yōu)化設(shè)計(jì)：配套提供抗兔IgG輕鏈HRP二抗及5%正常豬血清封閉方案，有效消除免疫沉淀洗脫物中55 kDa重鏈的干擾信號(hào)，確保在eIF3B分子量（110 kDa）附近獲得清晰的目標(biāo)條帶。

5. 精準(zhǔn)定量：基于比爾定律（A280=1.4對(duì)應(yīng)1 mg/ml IgG）進(jìn)行濃度測(cè)定，確保批次間一致性，提升實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。

6. 明確的表位區(qū)域：免疫原映射至100-150位氨基酸，該區(qū)域包含eIF3B的非經(jīng)典RRM基序。使用本抗體進(jìn)行IP或WB時(shí)，可檢測(cè)全長(zhǎng)蛋白，且識(shí)別位點(diǎn)不依賴于磷酸化或翻譯后修飾狀態(tài)。

使用注意事項(xiàng)

本產(chǎn)品僅限研究用途，不可用于臨床診斷。

緩沖液中含有疊d化鈉，操作時(shí)請(qǐng)佩戴手套和護(hù)目鏡，避免接觸皮膚或粘膜。廢棄物請(qǐng)按照當(dāng)?shù)匾?guī)定處理。

收貨后請(qǐng)立即儲(chǔ)存于2–8°C，切勿冷凍。緩沖液中已含0.1% BSA作為穩(wěn)定劑，但仍不建議冷凍，以免抗體聚集。如需長(zhǎng)期保存，可分裝后存放于2–8°C，避免反復(fù)開啟。

IP實(shí)驗(yàn)中，6 µg/mg裂解物為起始推薦量。eIF3B在常見細(xì)胞系（如HeLa、HEK293、U2OS）中表達(dá)豐度較高，可根據(jù)實(shí)際信號(hào)強(qiáng)度下調(diào)至4 µg/mg。若用于組織裂解物，可能需要增加用量。

WB實(shí)驗(yàn)中，eIF3B表觀分子量約110-116 kDa，建議使用8%或10% SDS-PAGE凝膠。轉(zhuǎn)印推薦使用PVDF膜，濕轉(zhuǎn)100V 1.5小時(shí)通常足夠。

IHC實(shí)驗(yàn)中，石蠟切片需充分脫蠟和水化。熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)后，應(yīng)讓切片自然冷卻至室溫（約20-30分鐘），以利抗原表位正確復(fù)性。建議設(shè)置陽性對(duì)照（如已知eIF3B高表達(dá)的組織，如肝臟或腫瘤組織）。