產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗QKI多克隆抗體（貨號(hào)：A300-183A），采用表位特異性親和純化工藝制備，以完整IgG形式提供。該抗體針對(duì)人QKI異構(gòu)體5的C端區(qū)域（第291位氨基酸至C末端）設(shè)計(jì)，能夠特異性識(shí)別異構(gòu)體5，而與其他7種已知QKI異構(gòu)體（1、2、3、4、6、7、7B）無(wú)交叉反應(yīng)。這一獨(dú)特的異構(gòu)體選擇性使其成為研究QKI異構(gòu)體特異性功能的理想工具。

QKI（quaking homolog，KH結(jié)構(gòu)域RNA結(jié)合蛋白）是一種RNA結(jié)合蛋白和翻譯抑制因子，在胚胎發(fā)育、髓鞘形成、少突膠質(zhì)細(xì)胞分化及前體mRNA剪接調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用。QKI已被確認(rèn)為精神分裂癥的候選基因，同時(shí)在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病及腫瘤中具有重要研究?jī)r(jià)值。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 具體信息

靶標(biāo) | QKI（異構(gòu)體5）

反應(yīng)種屬 | 小鼠、人

應(yīng)用 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 異構(gòu)體5的第291位至C末端

亞型 | IgG

標(biāo)記物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）

儲(chǔ)存 | 2 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊d化鈉

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存溫度：2 8 °C

有效期：1年

緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8），含0.09%疊d化鈉

疊d化鈉作為防腐劑存在。在使用HRP標(biāo)記二抗進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需注意疊d化鈉對(duì)過(guò)氧化物酶的抑制作用。如需進(jìn)行細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)或去除疊d化鈉，可通過(guò)透析或超濾換液。

本抗體采用了表位特異性親和純化工藝：

親和純化：抗血清通過(guò)固相載體上固定的特異性表位進(jìn)行親和層析純化。所使用的表位對(duì)應(yīng)人quaking homolog異構(gòu)體5的C端區(qū)域（參考序列AAH19917.1，GeneID 9444），具體位于第291位氨基酸至C末端之間。

異構(gòu)體選擇性驗(yàn)證：經(jīng)表位序列比對(duì)驗(yàn)證，該抗體識(shí)別的表位僅存在于異構(gòu)體5中，在以下異構(gòu)體中均不存在：

異構(gòu)體1、2、3、4、6、7、7B（對(duì)應(yīng)TrEMBL條目Q9P0Y1、Q9P0Y0、Q9P0X6、Q9P0X8、Q96PU7、Q969L9、Q96PU6）

這一特性是本產(chǎn)品的核心功能優(yōu)勢(shì)——能夠從多種QKI異構(gòu)體中特異性檢測(cè)異構(gòu)體5，而不受其他異構(gòu)體的干擾。

濃度測(cè)定：免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測(cè)定，設(shè)定條件為1 mg/ml IgG在280 nm波長(zhǎng)處吸光值為1.4。

推薦應(yīng)用與稀釋度

以下為經(jīng)過(guò)驗(yàn)證或推薦的應(yīng)用條件：

應(yīng)用類型 | 推薦稀釋度/用量 | 關(guān)鍵條件

免疫組織化學(xué)（IHC） | 1:500 1:2,000 | 推薦使用Tris-EDTA pH 9.0進(jìn)行抗原修復(fù)（FFPE切片）

免疫沉淀（IP） | 6 µg/mg裂解物 | 每毫克總蛋白裂解液使用6 µg抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:5,000 1:25,000 | 5% Milk-TBST封閉和稀釋，一抗孵育過(guò)夜

QKI生物學(xué)功能

QKI屬于STAR（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和RNA激活）家族成員，包含一個(gè)KH結(jié)構(gòu)域，能夠結(jié)合RNA序列“ACUAA"。其主要功能包括：

1. 前體mRNA剪接調(diào)控：QKI與剪接因子相互作用，調(diào)節(jié)多種靶基因的可變剪接事件

2. mRNA穩(wěn)定性調(diào)控：結(jié)合靶mRNA的3‘UTR，影響其降解或翻譯效率

3. 翻譯抑制：作為翻譯抑制因子，負(fù)調(diào)控特定蛋白的合成

在少突膠質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中，QKI通過(guò)調(diào)控髓鞘堿性蛋白（MBP）等基因的表達(dá)，對(duì)髓鞘形成至關(guān)重要。QKI敲除小鼠表現(xiàn)出廣泛的髓鞘發(fā)育缺陷和圍產(chǎn)期致死。

異構(gòu)體5的特殊性

人QKI基因通過(guò)可變剪接產(chǎn)生至少8種異構(gòu)體。異構(gòu)體5（又稱QKI-5）主要定位于細(xì)胞核，參與前體mRNA的加工和剪接調(diào)控；而異構(gòu)體6、7等主要定位于細(xì)胞質(zhì)，調(diào)控mRNA穩(wěn)定性和翻譯。研究QKI-5的特異性功能需要能夠區(qū)分異構(gòu)體5與其他剪接變體的抗體工具——這正是本產(chǎn)品的核心價(jià)值所在。

常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

問(wèn)題 | 可能原因 | 建議措施

WB出現(xiàn)多條非預(yù)期條帶 | 識(shí)別了其他QKI異構(gòu)體（但理論不應(yīng)發(fā)生）或非特異性結(jié)合 | 驗(yàn)證細(xì)胞系中QKI異構(gòu)體表達(dá)譜；提高一抗稀釋度至1:20,000；使用封閉肽作吸附對(duì)照

WB中約55 kDa處有條帶 | 免疫沉淀產(chǎn)物檢測(cè)時(shí)使用了抗H+L二抗 | IP產(chǎn)物檢測(cè)必須更換為抗兔IgG輕鏈HRP二抗，并添加5%正常豬血清

IHC無(wú)信號(hào)或弱信號(hào) | 抗原修復(fù)條件不佳 | 確保使用Tris-EDTA pH 9.0，延長(zhǎng)修復(fù)時(shí)間（微波高火10分鐘+低火10分鐘）

IP拉下效率低 | 抗體用量不足或裂解液中QKI含量低 | 增加抗體至10 µg/mg裂解物；使用過(guò)表達(dá)QKI-5的細(xì)胞裂解液作為陽(yáng)性對(duì)照

小鼠樣本信號(hào)弱 | 種屬反應(yīng)性為小鼠，但親和力可能低于人 | 嘗試降低稀釋度（如WB 1:5,000起始），延長(zhǎng)孵育時(shí)間

相關(guān)產(chǎn)品推薦

抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體——用于IP產(chǎn)物的WB檢測(cè)，避免重鏈干擾

山羊抗兔IgG（H+L）HRP——用于常規(guī)細(xì)胞裂解液WB檢測(cè)

QKI異構(gòu)體5過(guò)表達(dá)裂解液——用作WB陽(yáng)性對(duì)照

兔IgG同型對(duì)照——用于IHC陰性對(duì)照