產(chǎn)品概述

兔抗Bub1抗體親和純化抗體是一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人源Bub1（苯并咪唑出芽抑制解除同源物1）的高濃度兔多克隆抗體（貨號：A300-373A）。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以完整IgG形式提供，濃度為1000 µg/ml（1 mg/ml），適用于免疫沉淀（IP）、免疫印跡（WB）和免疫組織化學(xué)（IHC）。作為紡錘體檢查點核心激酶的特異性檢測工具，該抗體適用于有絲分裂調(diào)控、染色體分離及腫瘤相關(guān)研究。

技術(shù)參數(shù)

參數(shù) | 詳細信息

靶點 | Bub1（苯并咪唑出芽抑制解除同源物1）

反應(yīng)種屬 | 人

應(yīng)用 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區(qū)域 | 第1–50位氨基酸之間（N端）

亞型 | IgG

標記 | 非偶聯(lián)

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/ml

儲存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

濃度測定

采用比爾定律，以A280測定免疫球蛋白濃度（1 mg/ml IgG的A280為1.4）。本產(chǎn)品濃度為1000 µg/ml（1 mg/ml），即每微升含1 µg抗體。

儲存與穩(wěn)定性

儲存條件：2–8°C，切勿冷凍。冷凍會導(dǎo)致抗體聚集和變性。

有效期：自收貨之日起1年，在未受污染且按推薦條件儲存的情況下。

緩沖液組分：Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液（pH 7–8），含0.09%疊d化鈉作為防腐劑。

注意事項：疊d化鈉可能抑制過氧化物酶活性。在IP-WB檢測中，如果使用HRP標記的二抗，由于后續(xù)洗滌步驟充分，影響可忽略；但若需對本抗體進行直接酶標記，請預(yù)先通過透析去除疊d化鈉。

應(yīng)用與方法參數(shù)

推薦工作條件

應(yīng)用 | 推薦稀釋度/用量 | 特殊說明

免疫組織化學(xué)（IHC） | 1:500 – 1:2000 | FFPE切片推薦使用Tris-EDTA（pH 9.0）進行抗原修復(fù)

免疫沉淀（IP） | 6 µg/mg 裂解液 | 每毫克細胞/組織裂解蛋白使用6 µg抗體

免疫印跡（WB） | 1:1000 – 1:5000 | 過夜孵育，5%牛奶-TBST封閉

靶點生物學(xué)功能

Bub1在有絲分裂檢查點中的核心作用

Bub1（budding uninhibited by benzimidazoles 1）是紡錘體檢查點（也稱有絲分裂檢查點）的關(guān)鍵激酶。紡錘體檢查點的功能是確保在所有復(fù)制的染色單體與雙極紡錘體正確連接之前，細胞不進入后期（anaphase）——即不啟動姐妹染色單體的分離。這一機制防止了非整倍體的產(chǎn)生，對維持基因組穩(wěn)定性至關(guān)重要。

具體分子功能

1. 動粒靶向：Bub1負責將其他檢查點蛋白——包括BubR1（Bub1相關(guān)蛋白）、Mad2和Polo樣激酶（Plk1）——招募至動粒（kinetochore）上，形成功能性檢查點信號復(fù)合物。

2. Cdc20磷酸化：Bub1直接磷酸化Cdc20（后期促進復(fù)合物的共激活因子），抑制APC/C對Pds1/securin的泛素化降解，從而阻止姐妹染色單體的過早分離。

3. 激酶活性：Bub1本身是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，其激酶活性對于檢查點信號放大和維持等待信號至關(guān)重要。

臨床意義

腫瘤中的異常：Bub1表達下調(diào)或功能缺失突變與染色體不穩(wěn)定性（CIN）和多種人類癌癥（如結(jié)直腸癌、乳腺癌、肝癌等）相關(guān)。

潛在治療靶點：Bub1在一些增殖活躍的腫瘤中過表達，成為抗有絲分裂藥物開發(fā)的潛在靶點。

別名

BUB1A

BUB1L

hBUB1

推定的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶

有絲分裂紡錘體檢查點激酶

典型應(yīng)用場景

1. 有絲分裂同步化實驗：使用nocodazole或Taxol處理細胞阻滯于有絲分裂期，通過WB檢測Bub1的表達和電泳遷移率（磷酸化修飾導(dǎo)致條帶上移）。

2. 紡錘體檢查點功能分析：在檢查點激活（如微管解聚藥物處理）或失活（如抑制激酶活性）條件下，通過IP檢測Bub1對Cdc20的結(jié)合或磷酸化水平。

3. 免疫組化評估腫瘤增殖：在人腫瘤組織切片中進行IHC染色，Bub1陽性細胞核（尤其在動粒區(qū)域點狀分布）可作為有絲分裂活性和染色體不穩(wěn)定性的標志。

4. 蛋白相互作用研究：利用本抗體進行免疫共沉淀（co-IP），結(jié)合質(zhì)譜鑒定與Bub1相互作用的新伙伴（如動粒蛋白、微管相關(guān)蛋白）。

5. 藥物靶點驗證：在Bub1激酶抑制劑處理后的細胞中，檢測Bub1對下游底物（如Cdc20）的磷酸化水平變化。

實驗注意事項

物種特異性：已驗證人樣本；小鼠、大鼠等物種可能存在交叉反應(yīng)，需自行測試。

IHC抗原修復(fù)條件：務(wù)必使用Tris-EDTA pH 9.0，不可用檸檬酸鹽緩沖液替代，否則可能導(dǎo)致無信號。

WB稀釋梯度：初次實驗建議從1:1000開始，若出現(xiàn)過強背景或非特異條帶，可提高至1:2000–1:5000。

IP-WB的輕鏈干擾：由于Bub1分子量（~120 kDa）遠大于抗體重鏈（~55 kDa），普通抗兔H+L二抗不會造成干擾；但仍推薦使用抗兔輕鏈特異性二抗以增加靈活性。

磷酸化形式檢測：Bub1在有絲分裂期發(fā)生高度磷酸化，表現(xiàn)為WB條帶向上遷移。建議配合磷酸酶處理對照確認信號來源于磷酸化修飾。

疊d化鈉影響：若進行細胞培養(yǎng)（如添加抗體至培養(yǎng)基）或體內(nèi)注射實驗，需通過透析或超濾去除疊d化鈉。

總結(jié)

A300-373A兔抗Bub1抗體憑借其1000 µg/ml的高濃度、N端特異性表位設(shè)計以及IHC/IP/WB三平臺驗證，是研究有絲分裂檢查點、動粒功能和基因組穩(wěn)定性的可靠工具。優(yōu)化的IHC抗原修復(fù)條件（Tris-EDTA pH 9.0）和WB高稀釋度（1:1000–1:5000）適用于從細胞裂解液到組織切片的多種樣本類型。結(jié)合IP實驗中6 µg/mg的明確用量，該抗體能夠高效富集內(nèi)源性Bub1及其復(fù)合物，為細胞周期和腫瘤生物學(xué)研究提供有力支持。

*本產(chǎn)品僅供研究使用，不用于診斷程序。