產(chǎn)品概述

兔抗BMAL1抗體親和純化是一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對(duì)人、小鼠源BMAL1（腦和肌肉ARNT樣蛋白1）的高濃度兔多克隆抗體（貨號(hào)：A302-616A）。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以完整IgG形式提供，濃度高達(dá)1000 µg/ml，適用于免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB），是研究晝夜節(jié)律核心調(diào)控機(jī)制的理想工具。

技術(shù)參數(shù)

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶點(diǎn) | BMAL1（ARNTL，芳香烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白樣1）

反應(yīng)種屬 | 小鼠、人

應(yīng)用 | IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區(qū)域 | 第576位與C末端之間（C端區(qū)域）

亞型 | IgG

標(biāo)記 | 非偶聯(lián)

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/ml

儲(chǔ)存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存條件：2–8°C，切勿冷凍。冷凍會(huì)導(dǎo)致抗體聚集和活性喪失。

有效期：自收貨之日起1年，在未受污染且按推薦條件儲(chǔ)存的情況下。

緩沖液組分：Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液（pH 7–8），含0.09%疊d化鈉作為防腐劑。

注意事項(xiàng)：疊d化鈉可能抑制過氧化物酶活性。在IP-WB檢測(cè)中，若使用HRP標(biāo)記的二抗，由于后續(xù)洗滌步驟充分，影響可忽略；但若需對(duì)本抗體進(jìn)行直接標(biāo)記，請(qǐng)預(yù)先通過透析去除。

應(yīng)用與方法參數(shù)

推薦工作條件

應(yīng)用 | 推薦稀釋度/用量 | 特殊說明

免疫沉淀（IP） | 6 µg/mg 裂解液 | 每毫克細(xì)胞/組織裂解蛋白使用6 µg抗體

免疫印跡（WB） | 1:2000 – 1:10,000 | 過夜孵育，5%牛奶-TBST封閉

免疫印跡（WB）詳細(xì)方案

1. 封閉與抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST（Tris緩沖鹽溶液 + 0.1% Tween-20）

2. 一抗孵育：推薦4°C搖床過夜（約16小時(shí)）

3. 細(xì)胞裂解液WB檢測(cè)：使用山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）作為二抗

4. 免疫沉淀物WB檢測(cè)：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉緩沖液中加入5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）以降低背景

注意：BMAL1的分子量約為68–75 kDa（取決于物種和翻譯后修飾）。WB推薦起始稀釋度為1:2000，若信號(hào)過強(qiáng)或出現(xiàn)非特異條帶，可提高至1:5000–1:10,000。建議使用陽性對(duì)照（如小鼠SCN組織裂解液、人HEK293細(xì)胞裂解液）和陰性對(duì)照（非免疫兔IgG）。

免疫沉淀（IP）詳細(xì)方案

用量：每毫克細(xì)胞裂解蛋白使用6 µg本抗體。

對(duì)照設(shè)置：使用相同濃度的兔同型對(duì)照IgG（非免疫血清）作為陰性對(duì)照。

裂解液要求：推薦使用非變性裂解緩沖液（如含蛋白酶抑制劑的RIPA或NP-40裂解液）以維持BMAL1與CLOCK等蛋白的相互作用。

二抗選擇：IP后WB檢測(cè)時(shí)，務(wù)必使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗（如HRP標(biāo)記的抗兔輕鏈抗體），以避免與IP抗體的重鏈（~55 kDa）產(chǎn)生交叉反應(yīng)。BMAL1分子量約為70 kDa，輕鏈二抗可以避免IP抗體重鏈（50 kDa）對(duì)目標(biāo)區(qū)域的干擾。

臨床與生理意義

代謝調(diào)控：BMAL1敲除小鼠出現(xiàn)葡萄糖不耐受、脂肪肝和早衰表型。

睡眠障礙：人類BMAL1基因變異與家族性睡眠相位延遲綜合征（FASPS）等節(jié)律紊亂相關(guān)。

腫瘤相關(guān)性：BMAL1在多種腫瘤中表達(dá)下調(diào)，與乳腺癌、結(jié)直腸癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的進(jìn)展和預(yù)后相關(guān)。

別名

ARNT樣蛋白1，腦和肌肉

bHLH-PAS蛋白MOP3（member of PAS protein 3）

bHLHe5（basic helix-loop-helix family member e5）

JAP3

PASD3（PAS domain-containing protein 3）

MOP3

睪丸組織精子結(jié)合蛋白Li 50e

典型應(yīng)用場(chǎng)景

1. 晝夜節(jié)律表達(dá)譜分析：在晝夜時(shí)間生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，收集不同時(shí)間點(diǎn)（ZT時(shí)間）的小鼠組織（如SCN、肝臟），通過WB檢測(cè)BMAL1蛋白的節(jié)律性表達(dá)波動(dòng)。

2. 蛋白相互作用研究：利用本抗體進(jìn)行免疫共沉淀（co-IP），結(jié)合WB或質(zhì)譜鑒定BMAL1與CLOCK、CRY1/CRY2、PER1/2等相互作用的動(dòng)態(tài)變化。

3. 翻譯后修飾分析：在磷酸酶或蛋白酶體抑制劑處理?xiàng)l件下，通過IP富集BMAL1，再用磷酸化特異性抗體或泛素抗體檢測(cè)其修飾狀態(tài)。

4. 基因敲低/過表達(dá)驗(yàn)證：在BMAL1 shRNA或CRISPR敲低細(xì)胞系中，使用本抗體驗(yàn)證敲低效率；在過表達(dá)BMAL1的細(xì)胞中確認(rèn)外源蛋白表達(dá)。

5. 組織特異性表達(dá)分析：檢測(cè)不同小鼠組織（腦、肌肉、肝臟、脂肪、心臟等）中BMAL1的表達(dá)水平，研究外周節(jié)律器官的差異。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

物種交叉反應(yīng)性：已驗(yàn)證人與小鼠；大鼠、猴等其他物種需自行測(cè)試。

WB稀釋度：由于抗體濃度高（1 mg/ml），初次實(shí)驗(yàn)建議從1:2000開始。若在70 kDa處背景較高，可提高至1:5000或1:10,000。

IP-WB的輕鏈干擾：BMAL1分子量約70 kDa，IP抗體的重鏈（~55 kDa）可能與之接近。務(wù)必使用抗兔輕鏈特異性二抗或在WB中使用高分辨率凝膠延長(zhǎng)分離距離，必要時(shí)可考慮使用交聯(lián)的抗體IP方法。

蛋白降解敏感性：BMAL1在細(xì)胞裂解后容易降解，建議使用新鮮制備的裂解液并添加廣譜蛋白酶抑制劑（如PMSF、cocktail）。

核蛋白制備：BMAL1主要定位于細(xì)胞核，進(jìn)行IP或WB前建議提取核蛋白或使用強(qiáng)去垢劑（如RIPA）裂解。

疊d化鈉影響：若進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)（如添加抗體至培養(yǎng)基）或體內(nèi)注射實(shí)驗(yàn)，需通過透析去除。

總結(jié)

A302-616A兔抗BMAL1抗體憑借其1000 µg/ml的高濃度、C端特異性表位設(shè)計(jì)以及IP/WB雙平臺(tái)驗(yàn)證，是研究晝夜節(jié)律調(diào)控機(jī)制、生物鐘相關(guān)代謝疾病和腫瘤發(fā)生的可靠工具。優(yōu)化的WB稀釋范圍（1:2000–1:10,000）和明確的IP用量（6 µg/mg裂解液）適用于從小鼠組織到人細(xì)胞系的多類型樣本。結(jié)合輕鏈特異性二抗的使用，可有效避免IP實(shí)驗(yàn)中重鏈信號(hào)的干擾，獲得清晰、可信的檢測(cè)結(jié)果。

*本產(chǎn)品僅供研究使用，不用于診斷程序。