產(chǎn)品概述

牛IgG ELISA試劑盒（貨號：E11-118）由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款用于定量檢測牛源樣本中免疫球蛋白G（IgG）濃度的夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒。采用預(yù)包被抗牛IgG抗體的96孔板、生物素標(biāo)記的檢測抗體及鏈霉親和素-HRP（辣根過氧化物酶）放大系統(tǒng)，可對血清、血漿、初乳和牛奶等樣本中的IgG進(jìn)行高靈敏度定量。檢測范圍為0.69–500 ng/ml，適用于牛免疫狀態(tài)評估、初乳質(zhì)量監(jiān)控、乳制品檢測及獸醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域。

技術(shù)參數(shù)

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶點 | 牛IgG

反應(yīng)種屬 | 牛

應(yīng)用 | ELISA

檢測范圍 | 0.69 – 500 ng/ml

樣本類型 | 血清、血漿、初乳、牛奶

檢測方法 | 生物素標(biāo)記鏈霉親和素-HRP（夾心法）

儲存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收貨之日起6個月

試劑盒組分

組分 | 規(guī)格 | 數(shù)量

牛IgG預(yù)包被96孔板 | 96孔（8×12） | 1塊

牛IgG標(biāo)準(zhǔn)品 | 500 ng/管 | 2管

牛IgG檢測抗體 | 12 ml | 1瓶

20×稀釋緩沖液C | 25 ml | 1瓶

HRP溶液C | 12 ml | 1瓶

TMB底物液 | 12 ml | 1瓶

終止液 | 12 ml | 1瓶

20×洗滌緩沖液 | 50 ml | 1瓶

封板膜 | — | 6張

注：所有組分均在2–8°C條件下供應(yīng)，使用前需平衡至室溫（18–25°C）。

檢測原理

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法，具體步驟如下：

1. 包被：96孔板已預(yù)先包被抗牛IgG捕獲抗體。

2. 加樣：將牛IgG標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋后的待測樣本加入孔中，樣本中的牛IgG與固相捕獲抗體結(jié)合。

3. 檢測：洗板后加入生物素標(biāo)記的抗牛IgG檢測抗體，與已捕獲的IgG形成“捕獲抗體–IgG–檢測抗體"夾心復(fù)合物。

4. 信號放大：加入鏈霉親和素-HRP（HRP溶液C），通過生物素-鏈霉親和素高親和力結(jié)合將HRP偶聯(lián)至復(fù)合物上。

5. 顯色：加入TMB底物，HRP催化底物產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。加入終止液后顏色由藍(lán)變黃，在450 nm波長處測定吸光度。

6. 定量：樣本中的IgG濃度與顯色強(qiáng)度呈正相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣本的精確濃度。

樣本類型與處理

血清與血漿

采用無菌技術(shù)采集血液，避免溶血。血清樣本需在凝血后30分鐘內(nèi)離心分離；血漿樣本可使用EDTA、肝素或檸檬酸鈉抗凝。

樣本可在2–8°C儲存不超過24小時，長期保存需分裝凍存于-20°C或-80°C，避免反復(fù)凍融。

檢測前用1×稀釋緩沖液C進(jìn)行適當(dāng)稀釋（建議預(yù)實驗確定最佳稀釋倍數(shù)，通常在1:1000–1:100,000范圍內(nèi)）。

初乳與牛奶

初乳和牛奶樣本需脫脂處理（4°C，2000×g離心10分鐘，取澄清中間層）。

由于IgG含量很高（初乳中可達(dá)50 mg/ml以上），需進(jìn)行大倍數(shù)稀釋（如1:100,000–1:1,000,000）。建議使用試劑盒提供的稀釋緩沖液C進(jìn)行梯度稀釋。

稀釋后的樣本應(yīng)在4小時內(nèi)完成檢測。

實驗步驟概要

1. 試劑準(zhǔn)備：將20×洗滌緩沖液、20×稀釋緩沖液C用去離子水稀釋至1×工作液。所有組分平衡至室溫。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品制備：取1管標(biāo)準(zhǔn)品（500 ng），加入適當(dāng)體積的1×稀釋緩沖液C溶解，按試劑盒說明書進(jìn)行倍比稀釋，制備至少7個濃度點的標(biāo)準(zhǔn)曲線（建議范圍：0.69–500 ng/ml）。設(shè)置空白孔（僅稀釋緩沖液）。

3. 加樣與孵育：每孔加入100 µl標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋后的樣本，用封板膜覆蓋，室溫孵育2小時（或按說明書優(yōu)化條件）。

4. 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加入300 µl 1×洗滌緩沖液，洗滌3–5次，最后一次在吸水紙上拍干。

5. 加檢測抗體：每孔加入100 µl牛IgG檢測抗體（已預(yù)配成工作液），封板，室溫孵育1小時。重復(fù)洗滌步驟。

6. 加HRP溶液：每孔加入100 µl HRP溶液C，室溫避光孵育30分鐘。重復(fù)洗滌步驟。

7. 顯色：每孔加入100 µl TMB底物，室溫避光孵育15–20分鐘。觀察顏色變化（標(biāo)準(zhǔn)品高濃度孔應(yīng)呈現(xiàn)明顯藍(lán)色）。

8. 終止：每孔加入100 µl終止液，輕輕混勻，液體由藍(lán)變黃。

9. 讀取：30分鐘內(nèi)使用酶標(biāo)儀在450 nm波長處讀取吸光度（OD值）。若使用630 nm作為參比波長，可減去背景。

注意事項

1. 避免交叉污染：使用一次性吸頭，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本按順序加樣，不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品不要混用吸頭。

2. 洗滌充分：洗滌殘留的未結(jié)合抗體和HRP是降低背景的關(guān)鍵。推薦使用自動洗板機(jī)；若手洗，每孔加滿洗滌液后浸泡30秒，重復(fù)5次。

3. 顯色時間控制：TMB顯色時間根據(jù)環(huán)境溫度調(diào)整。若室溫較低，可適當(dāng)延長至25分鐘；反之若室溫較高（>25°C），可縮短至10–15分鐘。出現(xiàn)最高濃度標(biāo)準(zhǔn)孔變?yōu)樯钏{(lán)色、次高濃度孔明顯藍(lán)色時即可終止。

4. 避免氣泡：加樣和加底物時避免產(chǎn)生氣泡，否則會影響OD值讀數(shù)。

5. 樣本稀釋確定：由于血清、初乳等樣本中IgG含量差異極大，初次檢測建議進(jìn)行預(yù)實驗，分別測試1:1,000、1:10,000、1:100,000等稀釋倍數(shù)，確保樣本OD值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線中間范圍內(nèi)（0.3–1.8）。

儲存與穩(wěn)定性

整個試劑盒應(yīng)儲存于2–8°C，切勿冷凍。冷凍會導(dǎo)致包被抗體脫落和酶活性喪失。

未使用的預(yù)包被板條應(yīng)放回鋁箔袋中密封，在2–8°C干燥條件下保存，建議在開封后1個月內(nèi)使用完畢。

所有工作液（稀釋后洗滌緩沖液、稀釋緩沖液）建議現(xiàn)配現(xiàn)用，剩余工作液不宜再次冷凍保存。

典型應(yīng)用場景

1. 初乳質(zhì)量評估：犢牛被動免疫轉(zhuǎn)移依賴于初乳中IgG的攝入量。通過檢測初乳中IgG濃度（通常要求>50 mg/ml），評估初乳質(zhì)量，指導(dǎo)牧場管理。

2. 牛群免疫狀態(tài)監(jiān)測：定期檢測牛血清中IgG水平，評估疫苗免疫應(yīng)答效果或感染后的體液免疫狀態(tài)。

3. 乳制品加工監(jiān)控：檢測原料乳、巴氏殺菌乳或奶粉中的IgG含量，作為熱加工參數(shù)和質(zhì)量指標(biāo)。

4. 科研實驗：研究牛奶中IgG的穩(wěn)定性、不同飼養(yǎng)條件下牛免疫球蛋白的變化規(guī)律等。

*本產(chǎn)品僅供研究使用，不用于診斷程序。