產(chǎn)品概述

V5標簽抗體是一種用于檢測和純化V5表位標記重組蛋白的高親和力工具。本產(chǎn)品為山羊來源的多克隆抗體（貨號：S190-119），由艾美捷Bethyl Laboratories推出，經(jīng)抗原親和純化，以完整IgG形式提供，濃度為1 mg/ml。該抗體識別人工合成的V5標簽肽段（GKPIPNPLLGLDST），適用于酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、免疫細胞化學（ICC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）等多種應用場景。

技術參數(shù)

參數(shù) | 詳細信息

靶點 | V5標簽

應用 | ELISA、ICC、IP、WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

亞型 | IgG

標記 | 非偶聯(lián)

純化方式 | 抗原親和純化

濃度 | 1 mg/ml |

儲存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收貨之日起1年

緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.09%疊d化鈉

儲存與穩(wěn)定性

儲存條件：2–8°C，切勿冷凍。冷凍會導致抗體聚集和活性喪失。

有效期：自收貨之日起1年，在未受污染且按推薦條件儲存的情況下。

緩沖液組分：磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.09%疊d化鈉作為防腐劑。

注意事項：疊d化鈉可能抑制過氧化物酶活性。若需將本抗體酶標記或用于細胞培養(yǎng)實驗，請預先通過透析或超濾去除疊d化鈉。

應用與方法參數(shù)

注意：并非所有列出的應用均經(jīng)過生產(chǎn)實驗室的直接測試。以下稀釋范圍為文獻參考值，用戶需根據(jù)具體實驗體系進行優(yōu)化。

推薦工作條件

應用 | 推薦稀釋度/用量 | 備注

ELISA（檢測抗體） | 1:1000 – 1:30,000 | 作為一抗檢測V5標簽蛋白

ELISA（包被用） | 1:100 – 1:500 | 將抗體直接包被于微孔板捕獲V5標簽蛋白

免疫細胞化學（ICC） | 1:100 – 1:400 | 適用于細胞爬片或培養(yǎng)細胞的免疫熒光/染色

免疫沉淀（IP） | 1 – 4 µg/mg 裂解液 | 每毫克細胞裂解蛋白使用1–4 µg抗體

免疫印跡（WB） | 1:1000 – 1:30,000 | 過夜孵育，5%牛奶-TBST封閉

免疫印跡（WB）詳細方案

1. 封閉與抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST（Tris緩沖鹽溶液 + 0.1% Tween-20）。

2. 一抗孵育：推薦4°C搖床過夜（約16小時），稀釋度從1:5000開始摸索。

3. 二抗：使用驢抗山羊IgG重輕鏈抗體（貨號A50-101P）。由于本抗體來源于山羊，不可使用抗兔或抗小鼠二抗。

4. 檢測：根據(jù)二抗的標記（HRP、熒光等）進行化學發(fā)光或熒光成像。

優(yōu)化建議：由于本抗體為多克隆抗體，WB中可能出現(xiàn)非特異條帶。可通過提高稀釋度（如1:10,000–1:30,000）或增加洗滌次數(shù)降低背景。轉膜后使用麗春紅染色確認蛋白上樣量。

免疫沉淀（IP）詳細方案

用量范圍：每毫克細胞裂解蛋白使用1–4 µg本抗體。對于高表達的重組蛋白，可選用1–2 µg/mg；對內源性表達水平極低的蛋白，建議使用3–4 µg/mg。

對照設置：使用相同物種和亞型的非免疫山羊IgG作為陰性對照。

裂解液選擇：推薦使用非變性裂解緩沖液（如含蛋白酶抑制劑的NP-40或RIPA裂解液，離子強度適中），以維持標簽蛋白的天然構象和相互作用。

二抗選擇：IP后WB檢測時，若使用抗山羊IgG重輕鏈二抗，會檢測到IP抗體的重鏈（~55 kDa）和輕鏈（~25 kDa）。為避免干擾，可改用抗V5標簽的直接標記二抗，或使用Protein A/G磁珠進行IP時選擇交聯(lián)抗體的策略。

免疫細胞化學（ICC）詳細方案

樣本準備：細胞爬片或多孔板中培養(yǎng)的細胞，經(jīng)4%多聚甲醛固定15–20分鐘，0.2% Triton X-100透化（若檢測細胞內蛋白）。

封閉：使用5%正常驢血清或1% BSA-PBS封閉30–60分鐘。

一抗孵育：1:100–1:400稀釋本抗體，室溫孵育1–2小時或4°C過夜。

二抗：使用熒光標記的抗山羊IgG（如Alexa Fluor 488/555/647標記的驢抗山羊IgG），避免使用與固定劑產(chǎn)生自發(fā)熒光通道重疊的染料。

復染與封片：使用DAPI或Hoechst染色細胞核，封片后熒光顯微鏡觀察。

ELISA詳細方案

作為檢測抗體：將V5標簽蛋白直接或通過捕獲抗體包被于ELISA板，封閉后加入1:1000–1:30,000稀釋的本抗體，孵育1小時，洗滌后加入HRP標記的抗山羊IgG二抗，TMB顯色。

作為包被抗體：使用1:100–1:500稀釋的本抗體包被ELISA板（4°C過夜或37°C 2小時），封閉后加入含有V5標簽蛋白的樣本，再使用酶標記的標簽特異性二抗或直接標記的檢測抗體進行檢測。

實驗注意事項

物種交叉反應：本抗體為山羊抗V5，如果實驗樣本本身含有內源性山羊IgG（如使用山羊血清封閉），可能會產(chǎn)生背景。建議使用驢抗山羊二抗或選擇合適的封閉血清（如正常驢血清）。

二抗匹配：檢測時務必使用抗山羊IgG的二抗，不可使用抗兔或抗小鼠的二抗。

多克隆背景控制：由于是多克隆抗體，WB中可能出現(xiàn)非特異性條帶，建議設置空載體轉染或未轉染細胞裂解液對照，以區(qū)分特異信號。也可通過提高稀釋度（1:10,000以上）降低背景。

抗原表位可及性：若V5標簽位于融合蛋白的C端且被高級結構遮蔽，可能影響抗體結合。此時可嘗試在變性條件下（如WB、IP前煮沸樣品）或使用更強去垢劑的裂解液處理。

疊d化鈉去除：若需交聯(lián)抗體至瓊脂糖珠用于IP，疊d化鈉會抑制交聯(lián)反應，請預先通過透析去除。

*本產(chǎn)品僅供研究使用，不用于診斷程序。