質(zhì)譜級蛋白酶是指經(jīng)過特殊純化和質(zhì)量控制的蛋白酶，其核心特點是在質(zhì)譜水平檢測蛋白酶的漏切率和專一性，主要用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析前的酶切消化，以提高蛋白質(zhì)鑒定的準確性和效率。

常見的蛋白酶按質(zhì)控等級可分為三類：質(zhì)譜級、測序級、生化級。三者在性能和應用場景上各有側重，它們的區(qū)別直接決定了你能做什么實驗。

表 1.不同質(zhì)控級別產(chǎn)品的區(qū)別。

一句話總結：生化級求“有"，測序級求“準"，質(zhì)譜級求“精且穩(wěn)"。

自下而上的蛋白質(zhì)組學流程中，蛋白酶將完整蛋白切割為肽段，再經(jīng)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-MS/MS) 鑒定。

質(zhì)譜級胰蛋白酶因其特異性切割賴氨酸 (K) 和精氨酸 (R) 的羧基端，生成長度適中、帶正電荷的肽段，顯著提升電離和解離效率，成為常用工具。更多詳情可參考往期：蛋白組學樣本制備關鍵步驟：酶解 (附 Protocol)。

糖基化會影響蛋?藥物的療效，穩(wěn)定性和免疫原性。質(zhì)譜法因其高靈敏度、速度和穩(wěn)定性成為蛋白質(zhì)糖基化分析的有力工具。

N-糖分析：常用 PNGase F，能特異性識別天冬酰胺 (Asn) 殘基上的 N-糖，水解其與蛋白質(zhì)之間的酰胺鍵，釋放出糖鏈并使 Asn 殘基去酰胺化為天冬氨酸 (Asp) 。

O-糖分析：目前缺乏通用的 O-糖酶，多依賴化學法釋放，在溫和條件下高效斷裂 Ser/Thr 上的 O-糖鍵。

 

圖 1. 基于質(zhì)譜的糖蛋白組學和糖組學的一般策略^[1]。

多屬性方法 (Multi-Attribute Method, 簡稱 MAM) 是一種基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術 (LC-MS) 的分析方法，廣泛應用于生物醫(yī)藥研發(fā)和生產(chǎn)中，用于同時識別和定量蛋白類藥物的多種產(chǎn)品質(zhì)量屬性 (PQA) 或關鍵質(zhì)量屬性 (CQA)。

MAM 方法已成為生物制藥行業(yè)的新標準——它可以直接在肽段水平上監(jiān)測治療性蛋白藥物的 PQA 和雜質(zhì)。

MAM 是基于 LC-MS 的肽圖分析方法，流程包括：

(1) 樣品制備，需要變性、還原、烷基化和蛋白酶解，常用蛋白酶包括 Trypsin、Lys-C 等； 

(2) 肽段反相色譜分離，高分辨質(zhì)譜檢測； 

(3) 數(shù)據(jù)分析：DDA 數(shù)據(jù)建立 Spectral Library 目標肽段列表，DIA 數(shù)據(jù)進行肽段定量分析，旨在與來自參考樣品的數(shù)據(jù)集相比，檢測來自樣品的數(shù)據(jù)中未知峰和目標肽。

 

圖 2.MAM 實施流程^[2]。

質(zhì)譜級蛋白酶這個小能手，在好多地兒都大顯身手，它活性到底有多“頂"？我們以 Endoproteinase Asp-N (HY?E70196) 為例，看看質(zhì)譜級酶的真實表現(xiàn)！

               

這表明，質(zhì)譜級蛋白酶不僅活性高，而且每一位切割都精準到位，為下游數(shù)據(jù)質(zhì)量打下堅實基礎。

質(zhì)譜級蛋白酶之所以“不一樣"，核心在于：

? 質(zhì)譜水平驗證專一性與漏切率
? 極低的自切與非特異背景
? 高批次穩(wěn)定性，滿足組學與生物藥的嚴苛要求

MCE 可提供多種質(zhì)譜級蛋白酶，助力您的研究！

產(chǎn)品推薦

Trypsin（HY-129047A）

Endoproteinase Lys-C（HY-P3208B）

Trypsin/Lys-C complex protease（HY-E70574）

Endoproteinase Glu-C（HY-E70194）

Endoproteinase Asp-N（HY-E70196）

Endoproteinase Arg-C（HY-E70564）

Endoproteinase Lys-N（HY-E70563）

Chymotrypsin（HY-108910A）

Pepsin（HY-E70198）

Carboxypeptidase B（HY-E70201）

Lipase（HY-Y1422B）

參考文獻

[1] Haojie Lu, et al. Advancements in mass spectrometry-based glycoproteomics and glycomics, National Science Review, Volume 3, Issue 3, September 2016, Pages 345–364.

[2] Silvia Millán-Martín, Comprehensive multi-attribute method workflow for biotherapeutic characterization and current good manufacturing practices testing[J]. Nature Protocols volume 18, pages1056–1089 (2023).